当我们处理细胞之后，想看一下该处理对细胞中某一基因表达的影响，我们需要从蛋白水平来看一下该基因表达的蛋白的量的变化，那我们通常会做westernblot，对蛋白进行半定量，通过对westernblot结果的分析，我们可以知道该处理对基因的表达造成了什么影响。
1 、打开Image J 软件。
2 、导入WB 条带图片：File →Open →找到WB 条带。
3 、把图片转化成灰度图片：Image →Type →8-bit 。
4 、消除图片背景的影响：Process →Subtract Background ，在弹出的对话框中，填上50 基本就可以了，并勾上Lightbackground ，点击OK 。此时图片背景会变白一些。
5 、设置定量参数：Analyze →Set Measurements 。在弹出的对话框中勾选Area 、Mean grayvalue 、Min& max gray value 、Integrated density 。
6 、设置单位：Analyze →Set Scale 。在弹出的对话框“Unit of length ”后面填上“pixels ”，其他的不用改动。
7、 把WB 图片转换成亮带：Edit →Invert 。
8 、选择菜单栏下的不规则圆形工具，将圆圈手动拉倒第一条带，并尽量将条带都圈起来。
9 、点击菜单栏Analyze 下拉出现的measurement ，即可弹出你选定区域的灰度统计值。也可以点击快捷键（英文状态下的键盘m ）。
10 、手动移动不规则圆圈至下一条条带，重复8 、9 步骤，直至所有条带都被测量。
11 、当测定完所有条带，选结果中的“Edit ”的“Select All ”，然后复制数据“IntDen ”到Excel 表即可进行分析。也可以直接在Results 对话框中，选择File →Saveas ，直接导出excel 表格。
12 、在excel 表格中将目的蛋白的灰度值除以内参蛋白的灰度值，进行归一化处理。
13、在GraphpadPrism软件中作柱状图。
经过灰度统计分析后得到的结果更准确更有说服力，是不是感觉上升了一个档次呢？
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