2.检测步骤
2.1使用差量法在分析天平称取盲肠食糜。
2.2按照1 g︰19 ml的比例，在食糜样品中加入PBS溶液。
2.3在涡旋仪上振荡5 min混匀。
2.4将离心管置入离心机中，25℃，900 × g离心10 min。
2.5小心吸取上清液，置于离心管中备用。
2.6将脂多糖酶联免疫吸附试剂盒放置于室温平衡30 min。
2.7在5支无菌离心管中加入样品稀释液，并标 A、B、C、D和E，各加入150 μl样品稀释液。向A管中加入150 μl标准品，涡旋振荡30 s混匀后，从A管中吸取150 μl稀释液加入B管，以此类推。配制洗涤液备用。
2.8取出酶标板，加入50 μl的标准品/样品，加入抗体一50 μl，HRP亲和素50 μl，轻轻振荡混合均匀，覆膜，放入37 °C恒温培养箱，避光孵育60 min。
2.9弃去酶标板中液体，每孔加入300 μl洗涤液，轻轻摇晃振荡30 s，弃去洗液，在吸水纸上拍干，重复5次。
2.10加入TMB显色液，轻轻摇晃振荡混匀，在37 °C恒温培养箱中避光孵育10 min。
2.11轻轻摇晃酶标板，在波长450 nm读数。
2.12根据标准孔数据绘制标准曲线，根据OD值计算LPS浓度。
结果与分析
利用ELISA Calc回归拟合计算程序– v 0.1，绘制标准曲线：
1.根据标准曲线孔结果，输入与标准品浓度对应的OD值（图1），扣除零孔背景值，进行回归拟合。
2.点击“回归方程”，获得拟合曲线（图2）。
3.确定r2值 (与1越接近曲线越真实可靠，图3)。
4.点击由Y (反应/OD值) 计算X (浓度/剂量)
5.输入每孔对应OD值读数，获得LPS浓度 (EU/L)。
图2. Logistic曲线拟合（四参数）标准曲线
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