?用SnapGene法构建载体，再也不用看着载体图谱发愣了

上周我们教了用Genome Compiler法模拟构建载体，构建载体还有一个方法–SnapGene法，本期还是在之前的教学的基础上教大家用SnapGene法构建载体，以后再也不用看着载体图谱发愣了！

1、载体基因序列酶切位点引物

如何直观模拟、检测设计的酶切位点是否合适，构建后目标序列能否稳定融合？

首先我们需要获取目标片段序列、获取含酶切位点的引物、获取载体序列、图谱。

2、酶切位点引物与基因片段融合

以pEGFP-C1构建human p53 CDS过表达载体为例，首先打开软件，选择新建或者打开文件，将p53 基因序列导入，然后再点击菜单栏Actions中选择PCR。

3、直接酶切片段序列保存

在新弹出的页面中会默认加载p53基因序列，首先需要进行确认p53 CDS为模板，然后再左下方填入设计的含酶切位点引物。

引物输入以后，我们可以看到一部分显示为红色部分为酶切位点而引入的、一部分显示为黑色部分与我们的模板匹配的部分，然后再进行筛选，筛选PCR反应的酶类型决定是否平末端，最后查看PCR产物的大小，点击PCR保存。

4、酶切模拟

在新的页面中打开菜单栏Actions中选择Insert（插入片段），在新弹出的页面中有3种模式，分别是载体、插入片段以及产物，然后我们再选定载体/插入序列。本次操作默认打开载体模式中，选择确定载体/插入片段。

5、载体构建模拟

在载体模式下，选择载体后再选择酶和回收片段。

如何查看展示判断片段选择是否正确，可以看到下面的信息展示中，根据长度基本可以判断选择是正确的。

然后再调整插入片段的方向，如果方向正确，颜色会显示为绿色，否则会变成灰色，最后对我们的产物点击重命名执行克隆，保存。

6、载体构建模拟结果验证

保存之后会默认弹出我们进行模拟构建新形成的载体图谱，首先我们需要确认看到在MCS区是否有无插入片段，是否变大。

然后打开序列视图，将序列定位到我们所设计的引物附近，检查序列的融合性。绿色部分是载体部分原有的GFP标签，MCS为位点，紫色框内为我们插入的位置，可以看目标片段的三连密码子是否跟原有的GFP 三连密码子在一起，检查完成后我们的模拟构建就完成啦！

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