BODIPY脂滴染色流式荧光检测
探究在RA和OA的刺激下BMEC脂滴分泌的变化情况，之前因为共聚焦在区域选择方面认为影响因素较大，所以此次选用流式直接查看整体的分泌情况
- 样品流水 对应设置浓度如下
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 |
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| OA100 | OA200 | OA300 | OA400 | OA500 | CON | OA50 | OA100 | OA150 | OA200 | CON |
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操作步骤如下
- 吸出培养基，PBS清洗两遍
- 400μL胰酶消化，1mL完全培养基终止消化，转移至1.5mL棕色避光EP管里
- 1000rpm离心5min，弃上清
- 每管加入1mL 1μg/mL的BODIPY室温避光染色15min
- 离心，弃上清，PBS重悬离心弃上清，洗两到三遍
- 400μL PBS重悬后上机
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流式下机数据处理
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在summit软件里导入文件后（设置为英文路径），双击右侧如下标志，在中打开需要设置的第一个样品
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有荧光强度的细胞
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圈出细胞群，设门；–圈目标群
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图一设的门圈至（挪至图2双击）图二，接着图二用rectangle方形圈门右键移动至图三，图三则为圈到的信 强度。通过设门选取目的细胞，调整荧光信 形状对称性，去除杂信 等
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因为我这里的目的是想看实验组与对照组相比，BODIPY的绿色荧光强度是否有变化（峰的偏移），所以在前面设门一致的条件下，将三个（这里示例用了三个）over在一起直接比较，以便直观看出。接下来进行overlay，左上角由Histogram切换到overlay之后，参照原来的第三幅荧光峰图，在选项下选择之后同前一样双击蓝色空白处，出现新的图表框（此时是空白），单击新图标框的左上角，选择添加数据之后，双击每一组数据的第三幅图，也就是荧光强度值进行添加，就在新图表框中出现了下面我框选出来的红绿紫三个峰
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这个结果如果明显同样可以再做一个共聚焦一起看一下
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