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铁死亡|免疫浸润|肿瘤微环境
操作过程
1. 准备序列文件:以核苷酸序列为示例
准备fasta序列文件。每条序列可以单独为一个文件,也可以把所有序列放在同一文件内,如下图:
2. 多序列比对
打开MEGA 6,点击Align,选择Edit/Build Alignment,选择Create anew alignment,点击OK。
3. 多序列比对
导入序列后点击“W”(ClustalW)进行比对,也可以选择“Muscle”来比对。
选择Align DNA(如果是氨基酸序列,则会出现Align Protein)。弹出的窗口中设置比对参数,一般都是采用默认参数即可。点击OK,开始多序列比对。
4. 构建系统进化树
多序列比对窗口,点击Data,选择Phylogenetic Analysis(下图红框标注的位置),弹出窗口询问:所用序列是否编码蛋白质,根据实际情况选择Yes或No。此时,多序列比对文件就激活了,可以返回MEGA 5主界面建树了。
点击Phylogeny,选择Construct/Test Neighbor-Joining Tree。一般来讲,参数默认即可(也可根据用户的需要自己进行参数的调节),点击Compute。
PS:Construct/Test Maximum LikelihoodTree(ML)或Construct/Test Neighbor-Joining Tree(NJ)或Construct/Test Minimum-EvolutionTree(ME)为三种不同的建树方法,其中NJ方法最常用
5. 生成序列进化树后的修饰和保存
可以根据“View”中的选项对进化树的形状,然后通过“Image”对图形进行指定格式的保存。
Mega是一个功能非常强大的工具,以上只是它其中一种比较常用的功能。
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