使用image Pro plus 6.0分析细胞油红O染色结果计数/计算面积百分比

文章目录

• • • 前言
    • 油红O染色简单步骤
    • image Pro plus 6.0下载链接
    • 使用image Pro plus 6.0分析油红染色

前言

自己做实验需要给细胞脂滴染色，在 上找资料摸索找到的一些内容，能够快速方便的计算油红O染色后的脂滴数量以及占面积百分比，简单总结一下，如果有问题或者建议欢迎一起交流学习~

油红O染色简单步骤

我自己这次使用的六孔板，第一次做乳腺上皮细胞，直接用的师兄给的油红O染液（结果工作液状态太久可能失效了，也可能是细胞本身原因脂滴分泌不明显），实验失败了，但还是练手了后面分析过程记录下来

染色步骤：参考细胞油红o染色

• 用枪头吸出培养液，加入2mL PBS轻轻晃动漂洗，吸出PBS弃掉
• 每孔加入2mL 95%酒精（使用多聚甲醛固定更好，我直接用的细胞间现成的酒精），固定30min，固定的是细胞膜（吸一个孔加一个孔，防止孔内变干，脂滴破裂）
• 固定过程中准备染色液：将【油红储存液：去离子水=3:2稀释】（储存液为：0.5g油红干粉，溶于少量异丙醇中，然后加异丙醇至100ml，棕色瓶密封（或锡箔纸包裹避光）4℃保存，为储存液，可长期保存），这次使用的为师兄已经配制好的工作液，无需稀释，直接用0.45μm滤器过滤（细胞间滤器好找，滤纸不方便，开头试了70μm细胞滤 发现不行，还是有沉淀）滤至15mL离心管内，备用（过滤是为了防止油红染料颗粒污染背景，看起来脏）
• 吸出95%酒精固定液，每个孔加入1mL染色液（吸一个孔加一个孔），室温染色15min左右

苏木精复染步骤

• 染色完成后，60%异丙醇漂洗，每孔2mL，除去多余染料以及背景残留（调色，可显微镜下观察用60%异丙醇浸染到细胞质胞浆无色即可）
• 取1mL苏木精染料复染5min左右，条件有限的话油红染料和苏木精染料都可回收使用

脱色步骤

• 使用60%异丙醇漂洗或者75%酒精或者PBS漂洗都可以
• 我使用的六孔板，不需要长期保存，做完就扔，也就不需要像传统切片一样甘油封片
• 显微镜观察

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使用image Pro plus 6.0分析油红染色

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参考资料:
细胞油红o染色
实验必备技能，一看就会的油红染色指南